賽默飛分光光度計(jì) BioMate 160 使用技巧

一、概述

賽默飛分光光度計(jì) BioMate 160 是一款高性能紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、藥學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品分析以及教學(xué)實(shí)驗(yàn)。該儀器能夠在 190–1100 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行精確測(cè)量，支持單波長(zhǎng)、多波長(zhǎng)、掃描、動(dòng)力學(xué)和定量分析等多種模式。雖然設(shè)備本身功能完善，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，取決于使用者是否掌握科學(xué)的操作技巧。本文將從多個(gè)角度系統(tǒng)總結(jié) BioMate 160 的使用技巧，以幫助實(shí)驗(yàn)人員獲得最佳實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

二、基礎(chǔ)操作技巧

1. 光源使用

• 預(yù)熱：氘燈和鎢燈均需預(yù)熱 10–15 分鐘，以穩(wěn)定光強(qiáng)。

• 合理切換：紫外區(qū)（190–350 nm）使用氘燈，可見(jiàn)光區(qū)（350–1100 nm）使用鎢燈。

• 減少開(kāi)關(guān)：避免頻繁開(kāi)關(guān)光源，以延長(zhǎng)燈泡壽命。

2. 波長(zhǎng)選擇

• 針對(duì)性選擇：核酸測(cè)定用 260 nm，蛋白質(zhì)可用 280 nm 或染料法 595 nm。

• 光譜掃描：在不確定檢測(cè)峰值時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行全光譜掃描，選擇特征吸收峰。

• 校準(zhǔn)波長(zhǎng)：定期進(jìn)行校準(zhǔn)，避免因儀器老化造成誤差。

3. 比色皿操作

• 材質(zhì)匹配：紫外檢測(cè)用石英比色皿，可見(jiàn)光檢測(cè)用光學(xué)玻璃比色皿。

• 清潔度：比色皿外壁必須干凈，避免指紋和水滴影響光路。

• 方向一致：同一實(shí)驗(yàn)中比色皿放置方向應(yīng)一致，以保持光程相同。

• 輕拿輕放：避免劃傷光學(xué)面，劃痕會(huì)導(dǎo)致散射光干擾。

4. 樣品處理

• 濃度控制：樣品吸光度應(yīng)保持在 0.1–1.0 范圍，過(guò)高需稀釋。

• 避免氣泡：加樣時(shí)應(yīng)輕緩操作，氣泡會(huì)干擾光路。

• 樣品穩(wěn)定性：對(duì)光敏性或易氧化的樣品，應(yīng)避光或在短時(shí)間內(nèi)完成測(cè)量。

三、數(shù)據(jù)采集與分析技巧

1. 空白校準(zhǔn)

• 每次實(shí)驗(yàn)前必須進(jìn)行空白校準(zhǔn)。

• 校準(zhǔn)液應(yīng)與樣品溶劑完全一致，避免溶劑差異帶來(lái)系統(tǒng)誤差。

2. 重復(fù)性保證

• 每個(gè)樣品至少測(cè)定三次，取平均值。

• 對(duì)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)設(shè)定連續(xù)采樣，避免人為間隔過(guò)大導(dǎo)致數(shù)據(jù)跳躍。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

• 定量實(shí)驗(yàn)必須繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，避免單點(diǎn)換算。

• 標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度范圍應(yīng)覆蓋未知樣品的預(yù)期濃度。

4. 背景扣除

• 樣品中可能存在雜質(zhì)干擾，應(yīng)在相應(yīng)波長(zhǎng)進(jìn)行背景扣除。

• 核酸檢測(cè)應(yīng)同時(shí)監(jiān)測(cè) A260、A280 和 A230，以排查污染。

5. 數(shù)據(jù)存檔

• 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)及時(shí)導(dǎo)出并保存，避免因儀器重置而丟失。

• 對(duì)重要實(shí)驗(yàn)，應(yīng)保存完整光譜曲線，便于追溯。

四、應(yīng)用場(chǎng)景技巧

1. 核酸檢測(cè)

• 濃度換算：A260 = 1.0 時(shí)，雙鏈 DNA 濃度約為 50 μg/mL，RNA 約為 40 μg/mL。

• 純度判斷：A260/A280 = 1.8–2.0 表示核酸純度較高。

• 雜質(zhì)排查：A260/A230 偏低說(shuō)明可能有鹽或酚類殘留。

2. 蛋白質(zhì)檢測(cè)

• 紫外吸收法：適用于較純凈蛋白，但緩沖液中若含有吸收物質(zhì)則不適合。

• 染料法：如考馬斯亮藍(lán)法（595 nm），靈敏度高，適合常規(guī)檢測(cè)。

• 一致性控制：建議同一實(shí)驗(yàn)中使用同一品牌試劑，減少批次差異。

3. 酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)

• 反應(yīng)早期：應(yīng)重點(diǎn)記錄反應(yīng)初始線性階段，數(shù)據(jù)最具代表性。

• 采樣間隔：常設(shè)定 5–10 秒采樣一次，根據(jù)反應(yīng)速度調(diào)整。

• 溫度條件：反應(yīng)溫度需保持恒定，波動(dòng)會(huì)顯著影響反應(yīng)速率。

4. 微生物和細(xì)胞檢測(cè)

• OD600 測(cè)定：用于細(xì)胞或細(xì)菌生長(zhǎng)曲線繪制。

• 均勻性：測(cè)定前輕輕混勻，避免沉淀或團(tuán)聚導(dǎo)致測(cè)量不準(zhǔn)。

• 時(shí)間點(diǎn)一致：采樣間隔應(yīng)固定，保證曲線可比性。

5. 藥物與環(huán)境樣品檢測(cè)

• 全波段掃描：藥物降解研究需記錄光譜隨時(shí)間的變化。

• 多波長(zhǎng)測(cè)定：環(huán)境檢測(cè)樣品復(fù)雜，應(yīng)在多個(gè)波長(zhǎng)下檢測(cè)。

• 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照：與標(biāo)準(zhǔn)溶液比對(duì)，可提高可靠性。

五、維護(hù)與保養(yǎng)技巧

1. 光源維護(hù)

• 氘燈壽命約 1000 小時(shí)，應(yīng)記錄累計(jì)使用時(shí)間，及時(shí)更換。

• 鎢燈壽命較長(zhǎng)，但也需定期檢測(cè)亮度。

• 建議一次實(shí)驗(yàn)中保持光源常亮，避免頻繁開(kāi)關(guān)。

2. 儀器清潔

• 每次實(shí)驗(yàn)后清潔比色皿槽，防止殘液腐蝕。

• 光學(xué)窗口應(yīng)使用無(wú)塵布清潔，避免使用粗糙紙巾。

• 長(zhǎng)期不用時(shí)應(yīng)加蓋防塵罩。

3. 校準(zhǔn)與檢測(cè)

• 定期進(jìn)行波長(zhǎng)校準(zhǔn)與光度校正。

• 若出現(xiàn)異常漂移，應(yīng)及時(shí)聯(lián)系專業(yè)技術(shù)人員。