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NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的一款多通道微量分光光度計(jì)，專(zhuān)為高通量核酸、蛋白及其他生物分子檢測(cè)設(shè)計(jì)。其獨(dú)特之處在于無(wú)需比色皿，僅需1~2 μL樣品即可完成檢測(cè)，同時(shí)具備寬廣的光譜掃描能力。光譜范圍是儀器最核心的性能參數(shù)之一，它決定了可檢測(cè)分子的種類(lèi)、靈敏度及精確度。理解NanoDrop Eight的光譜范圍，不僅能幫助科研人員合理選擇實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ?，還能確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性與可重復(fù)性。
分光光度法通過(guò)測(cè)定樣品在特定波長(zhǎng)下對(duì)光的吸收程度，進(jìn)而推算物質(zhì)的濃度或結(jié)構(gòu)特征。其基本依據(jù)是比爾-朗伯定律：
A = εbc
其中：
A：吸光度
ε：摩爾吸光系數(shù)
b：光程長(zhǎng)度
c：溶液濃度
光譜范圍決定了儀器能夠覆蓋的波長(zhǎng)區(qū)間。不同物質(zhì)在紫外區(qū)、可見(jiàn)區(qū)或近紅外區(qū)有特定吸收峰，只有在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)范圍內(nèi)，才能準(zhǔn)確檢測(cè)其濃度與特性。
紫外區(qū)：200~400 nm，常用于核酸、蛋白及有機(jī)分子檢測(cè)。
可見(jiàn)區(qū)：400~800 nm，主要用于顯色反應(yīng)后的定量分析。
近紅外區(qū)：800 nm以上，多用于結(jié)構(gòu)研究或雜質(zhì)檢測(cè)。
NanoDrop Eight采用氙閃光燈作為光源，具備高強(qiáng)度、穩(wěn)定性好和使用壽命長(zhǎng)的特點(diǎn)。其脈沖式發(fā)光機(jī)制減少了熱效應(yīng)對(duì)檢測(cè)的干擾。
NanoDrop Eight的光譜掃描范圍覆蓋 190 nm至850 nm。
190~230 nm：用于檢測(cè)蛋白中肽鍵吸收峰和部分有機(jī)溶劑背景。
230~320 nm：涵蓋核酸和芳香族氨基酸的特征吸收峰。
320~800 nm：適用于蛋白定量顯色法及各種比色反應(yīng)。
800~850 nm：多用于背景修正與部分特殊檢測(cè)。
NanoDrop Eight利用光纖與固定光程系統(tǒng)設(shè)計(jì)，自動(dòng)調(diào)整光程長(zhǎng)度（0.05 mm、0.2 mm、1.0 mm等），實(shí)現(xiàn)高濃度樣品與低濃度樣品的兼容檢測(cè)。
波長(zhǎng)：260 nm
檢測(cè)范圍：2 ng/μL~15000 ng/μL dsDNA
純度評(píng)估：260/280比值（核酸與蛋白雜質(zhì)），260/230比值（核酸與有機(jī)物或鹽類(lèi)雜質(zhì)）。
光譜應(yīng)用：完整光譜掃描可顯示峰形，幫助判斷樣品是否受污染。
直接檢測(cè)：280 nm（芳香族氨基酸吸收峰）。
染料法檢測(cè)：
考馬斯亮藍(lán)法：595 nm
BCA法：562 nm
Bradford法：一般取595 nm或562 nm
光譜應(yīng)用：通過(guò)190~230 nm區(qū)間可進(jìn)一步分析肽鍵信息。
波長(zhǎng)：600 nm（OD600，用于細(xì)菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)）。
光譜意義：完整掃描有助于區(qū)分濁度與特定代謝產(chǎn)物吸收峰。
色素與代謝物：如血紅素在400~450 nm有強(qiáng)吸收。
納米材料：如金納米粒子在520 nm有等離子體共振峰。
環(huán)境與藥物分析：部分有機(jī)分子在300~500 nm范圍內(nèi)具有特征吸收。
適用于常規(guī)濃度檢測(cè)，如核酸260 nm、蛋白280 nm。
260/280比值：判斷核酸樣品中蛋白污染。
260/230比值：判斷有機(jī)物或鹽離子污染。
在190~850 nm范圍內(nèi)連續(xù)掃描，可獲得完整光譜曲線(xiàn)，用于質(zhì)量控制和未知樣品分析。
NanoDrop Eight可自動(dòng)縮短光程應(yīng)對(duì)高濃度樣品，避免信號(hào)飽和。
核酸：260 nm處明顯峰值。
蛋白：280 nm峰值明顯，若230 nm處有較強(qiáng)吸收，提示鹽或有機(jī)物污染。
顯色反應(yīng)：在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)有穩(wěn)定峰值。
定量結(jié)果：ng/μL或mg/mL。
純度比值：260/280、260/230。
光譜曲線(xiàn)：可導(dǎo)出為CSV或圖像格式。
線(xiàn)性范圍：樣品吸光度應(yīng)在0.1~1.5之間。
背景修正：自動(dòng)扣除空氣或緩沖液背景信號(hào)。
原因：比對(duì)界面殘留、樣品不均勻。
解決：重新清潔檢測(cè)平臺(tái)，確保樣品均勻混勻。
原因：濃度過(guò)高，超出線(xiàn)性范圍。
解決：稀釋樣品后重新測(cè)定。
原因：光源壽命不足或環(huán)境干擾。
解決：檢查光源狀態(tài)，必要時(shí)更換。
每次檢測(cè)前先用純水清潔檢測(cè)平臺(tái)。
對(duì)于不同緩沖液，應(yīng)先做空白掃描。
樣品量盡量一致，保持在1.5~2 μL。
重要樣品至少重復(fù)測(cè)量?jī)纱?，取平均值?/p>
建立實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)，便于后續(xù)分析。
基因組學(xué)：確保DNA純度，保證下游測(cè)序質(zhì)量。
蛋白質(zhì)組學(xué)：準(zhǔn)確測(cè)定蛋白濃度，保證電泳與質(zhì)譜分析穩(wěn)定。
微生物學(xué)：OD600監(jiān)測(cè)細(xì)菌生長(zhǎng)，結(jié)合代謝物光譜分析。
藥物研發(fā)：檢測(cè)候選分子的特征吸收峰。
環(huán)境監(jiān)測(cè)：檢測(cè)水體中的污染物。
賽默飛NanoDrop Eight分光光度計(jì)的光譜范圍覆蓋190~850 nm，為核酸、蛋白及多種生物分子的檢測(cè)提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。從單波長(zhǎng)檢測(cè)到全光譜掃描，從定量分析到質(zhì)量控制，其寬光譜范圍賦予研究人員更多靈活性。只有在充分理解光譜范圍的前提下，合理選擇波長(zhǎng)與檢測(cè)模式，才能保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。
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