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伯樂（Bio-Rad）電轉(zhuǎn)儀是一種專業(yè)用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜的實驗設(shè)備，廣泛應(yīng)用于Western Blot實驗中，將SDS-PAGE分離的蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上（如PVDF或NC膜），為后續(xù)抗體雜交檢測做準(zhǔn)備。該儀器依靠電場作用完成蛋白遷移，可實現(xiàn)高效、清晰的蛋白條帶轉(zhuǎn)移。
伯樂電轉(zhuǎn)系統(tǒng)根據(jù)應(yīng)用場景分為多個版本，包括傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)系統(tǒng)（如Mini Trans-Blot? Cell）和快速轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)（如Trans-Blot? Turbo?），滿足不同用戶在轉(zhuǎn)膜速度、精度、通量和操作便捷性上的需求。
主機電源模塊：設(shè)定電壓、電流和運行時間，帶有液晶顯示。
轉(zhuǎn)膜模塊：包括電極板、支撐夾層、轉(zhuǎn)膜卡夾、冷卻系統(tǒng)等。
電極接口和導(dǎo)線：紅黑兩極對應(yīng)陽極和陰極。
轉(zhuǎn)膜耗材：
聚丙烯酰胺凝膠；
膜（PVDF或NC）；
濾紙（Whatman）；
轉(zhuǎn)膜緩沖液。
當(dāng)電流通過轉(zhuǎn)膜夾層時，蛋白質(zhì)在電場作用下從凝膠遷移到膜上（陰極→陽極方向）。轉(zhuǎn)移過程保持蛋白構(gòu)象穩(wěn)定，且盡量避免蛋白擴散或降解。成功轉(zhuǎn)膜的關(guān)鍵是：
合理設(shè)置電壓、電流；
確保夾層結(jié)構(gòu)無氣泡；
緩沖液電導(dǎo)性適中、溫度控制良好。
凝膠處理：
電泳完成后取出凝膠，切除泳道不需要區(qū)域；
剪裁至合適尺寸，保留蛋白條帶區(qū)域。
膜處理：
NC膜可直接使用；
PVDF膜需用甲醇活化1分鐘后轉(zhuǎn)入水→緩沖液中平衡；
剪裁大小略大于凝膠，確保完全覆蓋。
緩沖液配制：
常用Tris-Glycine緩沖液，含20%甲醇；
配好后低溫保存，使用時冷卻至4°C。
濾紙和墊層準(zhǔn)備：
濾紙和海綿墊剪裁與凝膠大小一致；
浸泡在冷緩沖液中至少5分鐘，充分潤濕。
裝配順序如下（自下而上）：
黑色電極（陰極）側(cè)：
海綿墊
濾紙
凝膠
膜（PVDF/NC）
濾紙
海綿墊
每層鋪放后，用玻棒輕輕滾壓去除氣泡，尤其是凝膠-膜之間。
固定夾具夾緊后插入電泳槽，保證方向正確：
黑色（陰極）連接凝膠面；
紅色（陽極）連接膜面；
電流方向為“黑進紅出”。
根據(jù)蛋白大小和膠厚度設(shè)置不同參數(shù)：
| 條件 | 電壓(V) | 時間(h) | 推薦類型 |
|---|---|---|---|
| 小分子蛋白 | 100 | 1 | 快速轉(zhuǎn)膜 |
| 中分子蛋白 | 100 | 1.5 | 標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)膜 |
| 大分子蛋白 | 70 | 2–3 | 長時低壓轉(zhuǎn)膜 |
溫馨提示：電流不應(yīng)超過350 mA，確保緩沖液不升溫過快。
啟動電源，監(jiān)控電壓、電流及溫度。
完成后關(guān)閉電源，取出膜并進行短暫染色（如Ponceau S）確認蛋白轉(zhuǎn)移效果。
用純水沖洗去除染色劑，晾干或封閉，準(zhǔn)備后續(xù)抗體孵育步驟。
該型號主打5–10分鐘快速轉(zhuǎn)膜，可大幅提高效率，適合高通量或緊急實驗需求。
使用專用Turbo轉(zhuǎn)膜包（包括預(yù)制凝膠-膜夾層）；
插入電轉(zhuǎn)模塊后，主機自動識別程序；
啟動后自動完成電壓調(diào)節(jié)與運行；
轉(zhuǎn)膜完成后立即可用于免疫檢測。
PVDF膜：
機械強度高、蛋白結(jié)合能力強；
需甲醇預(yù)處理；
適合后續(xù)長期保存或剝離。
NC膜：
操作簡便，價格低；
容易脆裂、不適合高溫剝離。
膜與凝膠必須緊密貼合；
轉(zhuǎn)膜前去除所有氣泡；
緩沖液要充分預(yù)冷，防止蛋白變性。
可將膜朝電場方向略傾斜放置，促進定向遷移；
對大分子蛋白使用SDS加入轉(zhuǎn)膜緩沖液，增強釋放；
多重轉(zhuǎn)膜實驗需更換新膜避免污染。
| 問題現(xiàn)象 | 可能原因 | 建議對策 |
|---|---|---|
| 條帶無信號 | 蛋白未轉(zhuǎn)出 / 膜裝反 / 轉(zhuǎn)膜不足 | 檢查方向 / 延長時間 |
| 條帶彌散 | 轉(zhuǎn)膜電壓過高 / 熱積聚 | 降低電壓 / 冷卻緩沖液 |
| 泡痕干擾 | 膜與凝膠間有氣泡 | 重裝夾層 / 滾去氣泡 |
| 條帶偏移 | 夾層不均勻 / 濾紙厚薄不一 | 使用一致濾紙 / 調(diào)整壓力 |
| 電流過高 | 液面過高 / 漏液 | 控制緩沖液體積 / 檢查夾緊 |
使用后及時清洗電泳槽和電極板；
定期擦拭主機外殼，保持通風(fēng)干燥；
存儲時將電源線和電極線松弛收好；
若長期不使用，應(yīng)斷電保存，防止電容老化。
將膜分段與兩個凝膠結(jié)合，用于同批樣本不同抗體染色，提高效率。
轉(zhuǎn)膜后預(yù)染蛋白或Ponceau S染色可提前判斷條帶對應(yīng)泳道，減少后期誤識。
利用蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線與膜圖像系統(tǒng)聯(lián)用，實現(xiàn)半定量分析。
伯樂電轉(zhuǎn)儀以其精密性、兼容性與高穩(wěn)定性在蛋白轉(zhuǎn)膜實驗中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。通過標(biāo)準(zhǔn)操作流程、合理參數(shù)設(shè)置與細致日常維護，實驗人員可以獲得高質(zhì)量、重復(fù)性強的轉(zhuǎn)膜結(jié)果。
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