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Bio?Rad “伯樂” Gene Pulser Xcell 電穿孔系統(tǒng)（貨號(hào) 1652660）是一款模塊化設(shè)計(jì)、功能全面、適用于多種細(xì)胞類型（包括哺乳動(dòng)物、植物原生質(zhì)體、細(xì)菌、酵母等）基因轉(zhuǎn)染、電穿孔設(shè)備。
該系統(tǒng)由主機(jī)（Main Unit）、指數(shù)波模塊（CE Module）、方波模塊（PC Module）、ShockPod? 電擊槽及相應(yīng)比色皿組成。
其中，型號(hào) 1652660為“總電穿孔系統(tǒng)”（Total System）版本，含 CE 和 PC 模塊，覆蓋真核細(xì)胞與原核細(xì)胞兩大類。
電壓設(shè)置是電穿孔成功的關(guān)鍵參數(shù)之一。下面重點(diǎn)介紹如何在該系統(tǒng)中進(jìn)行電壓設(shè)置，并輔以相關(guān)波形、比色皿間隙、樣本類型、優(yōu)化思路及常見注意事項(xiàng)，以便用戶熟練、安全地操作設(shè)備。
在電穿孔過程中，施加在細(xì)胞懸液上的電場強(qiáng)度（通常以 kV/cm 為單位）、脈沖持續(xù)時(shí)間、波型（指數(shù)波或方波）等協(xié)同作用，決定了細(xì)胞膜的瞬時(shí)通透性，從而影響轉(zhuǎn)染/導(dǎo)入效率與細(xì)胞存活率。
在 Gene Pulser Xcell 系統(tǒng)中：
輸出電壓范圍為 10–3000 V。
當(dāng)使用指數(shù)波模式時(shí)，可設(shè)定電容、電阻與電壓；當(dāng)使用方波模式時(shí)，可設(shè)定脈沖寬度（如 0.05 ms–10 ms 等）、脈沖次數(shù)、間隔時(shí)間。
比色皿的電極間隙（如 0.1 cm、0.2 cm、0.4 cm）也直接影響電場強(qiáng)度：例如在 0.2 cm 杯中，同樣 V 電壓下，電場強(qiáng)度 = V ÷ 0.2 (cm) = (5×V) kV/cm 。因此在設(shè)定電壓時(shí)必須參照比色皿間隙。
所以，電壓設(shè)置不僅要看設(shè)備讀數(shù)，更應(yīng)考慮比色皿規(guī)格、細(xì)胞類型、緩沖液導(dǎo)電性、樣本體積、電阻情況等多重因素。
以下為常規(guī)操作流程，適用于 1652660 系統(tǒng)，建議用戶熟悉各項(xiàng)參數(shù)設(shè)定并做好記錄優(yōu)化。
打開主機(jī)、連接 CE 模塊（如果做指數(shù)波）或 PC 模塊（如果做方波）。
插入 ShockPod 電擊槽，將比色皿（0.1 cm／0.2 cm／0.4 cm）正確放置。
確保電極干凈、沒有氣泡，樣品液體體積適中（推薦不超過比色皿容量范圍，且無氣泡）——?dú)馀莼虍愇锟蓪?dǎo)致電弧。
在界面中選擇波型：如果為真核細(xì)胞（如哺乳動(dòng)物）通常選“指數(shù)波（Exponential Decay）”，若為細(xì)菌／酵母則可選“方波（Square Wave）”。
首先知道比色皿間隙：例如 0.2 cm 或 0.4 cm。
決定目標(biāo)電場強(qiáng)度（例如為了細(xì)胞類型可能推薦 kV/cm 級(jí)別），然后根據(jù)間隙計(jì)算所需電壓。例如：若選 0.2 cm 比色皿，目標(biāo)電場強(qiáng)度 2.0 kV/cm，則電壓約 0.2 cm × 2.0 kV/cm = 0.40 kV = 400 V。
在界面里輸入對(duì)應(yīng)電壓數(shù)值。
進(jìn)入菜單選擇波型。
使用上下箭頭選擇“電壓”參數(shù)，將高亮后輸入目標(biāo)值（如 400 V）。
若為指數(shù)波：還需設(shè)定電容（μF）和可能的電阻（Ω）或設(shè)為開路（∞）。
若為方波：設(shè)定脈沖寬度（ms）、脈沖次數(shù)（1-10次）、脈沖間隔（s）。
確認(rèn)輸入后，設(shè)備將激活“Pulse”鍵，準(zhǔn)備釋放電擊。
按下“Pulse”鍵，設(shè)備開始釋放脈沖，屏幕會(huì)顯示實(shí)際施加電壓、電流或電阻反饋。
若設(shè)備檢測到電?。ˋrc）或異常波形，應(yīng)立即停止并檢查樣本準(zhǔn)備情況。
將數(shù)據(jù)記錄下來，比如成功經(jīng)過無電弧、細(xì)胞恢復(fù)良好、轉(zhuǎn)染效率高，應(yīng)將該設(shè)定保存為用戶協(xié)議，以便日后調(diào)用。
脈沖后立即將細(xì)胞從比色皿轉(zhuǎn)移至溫?zé)崤囵B(yǎng)基中靜置恢復(fù)。 例如5-10分鐘再接種。
分析轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞活力、是否有電弧損傷、是否有細(xì)胞死亡等。
若效果不理想，則返回步驟 2 進(jìn)行參數(shù)微調(diào)：如適當(dāng)提高電壓、縮短時(shí)間、減少脈沖次數(shù)，或改變比色皿規(guī)格。
根據(jù)不同樣本類型及比色皿規(guī)格，以下為經(jīng)驗(yàn)推薦（僅供參考，具體仍需優(yōu)化實(shí)驗(yàn)）：
哺乳動(dòng)物細(xì)胞（使用 0.4 cm 比色皿）：可先嘗試電壓 250-300 V。
0.2 cm 比色皿中（較窄間隙，電場強(qiáng)度高）：可嘗試電壓 1800-2500 V（如某快速指南所示）。
細(xì)菌／酵母（方波模式）可能使用更高電壓但極短脈沖時(shí)間。因?yàn)樵O(shè)備支持10-3000 V。
在具體操作中，若觀察到以下情況，可對(duì)應(yīng)調(diào)整：
若轉(zhuǎn)染效率低，可能電壓偏低或脈沖時(shí)間太短 → 可適當(dāng)升高電壓或延長脈沖寬度。
若細(xì)胞死亡率高、裂解嚴(yán)重，可能電壓過高、電場強(qiáng)度過大或脈沖次數(shù)過多 → 應(yīng)降低電壓、縮短脈沖、或減少脈沖次數(shù)。
若經(jīng)常發(fā)生電弧，可能樣本中有氣泡、電極間隙不正確、緩沖液導(dǎo)電性太高 → 必須先解決這些物理問題，再調(diào)整電壓。
忽視比色皿規(guī)格（間隙）：誤把 0.4 cm 當(dāng)作 0.2 cm，導(dǎo)致實(shí)際電場強(qiáng)度低于預(yù)期。
直接照搬文獻(xiàn)電壓值：不同設(shè)備、不同緩沖液、不同細(xì)胞類型皆有差別，應(yīng)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
只關(guān)注電壓，不看脈沖時(shí)間、脈沖次數(shù)、波型：這些參數(shù)與電壓共同決定穿孔效果。
忽視電弧風(fēng)險(xiǎn)：電壓設(shè)定過高、樣本有氣泡、液體離子強(qiáng)度高都易導(dǎo)致電弧，嚴(yán)重影響細(xì)胞活力。
忽略設(shè)備反饋或參數(shù)記錄：系統(tǒng)可存儲(chǔ)用戶協(xié)議，建議保存成功參數(shù)，以便重復(fù)使用。
在正式實(shí)驗(yàn)前做一系列梯度優(yōu)化試驗(yàn)，如：電壓從低到高（e.g., 200V, 300V, 400V, 500V），其他參數(shù)固定，看轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞存活率。
建議每次更換比色皿、樣本類型、緩沖液或細(xì)胞株時(shí)重新優(yōu)化電壓。
記錄每次使用的設(shè)備編號(hào)、比色皿規(guī)格、電壓、波型、脈沖時(shí)間、細(xì)胞狀態(tài)、轉(zhuǎn)染效率，以便長期建立經(jīng)驗(yàn)庫。
在電壓設(shè)定較高（如超過1000 V）時(shí)，務(wù)必保障操作環(huán)境安全、電擊槽接地良好、操作人員遠(yuǎn)離電極。
若長期進(jìn)行大量電穿孔，可考慮設(shè)備散熱、清潔維護(hù)、電極檢查，避免因設(shè)備老化影響輸出電壓準(zhǔn)確性。
電壓是電穿孔流程中的核心變量，但其作用并非孤立。正確的電壓設(shè)置配合合適的波型、脈沖時(shí)間、比色皿規(guī)格、緩沖體系、細(xì)胞狀態(tài)才能實(shí)現(xiàn)優(yōu)良的轉(zhuǎn)染效果。具體來說：
電壓決定電場強(qiáng)度，對(duì)細(xì)胞膜產(chǎn)生的瞬時(shí)電穿孔效果至關(guān)重要。
波型（指數(shù)波 vs 方波）決定電壓釋放方式：指數(shù)波電壓快速衰減，適合某些細(xì)胞；方波電壓保持穩(wěn)定一定時(shí)間，適合其它類型。
比色皿規(guī)格決定電極間隙，從而決定在同一電壓下的電場強(qiáng)度。
脈沖時(shí)間、次數(shù)決定電場作用時(shí)間，對(duì)穿孔程度與細(xì)胞損傷有直接影響。
緩沖液的電導(dǎo)性、細(xì)胞懸液濃度、細(xì)胞狀態(tài)（周期、健康程度）也影響實(shí)際效果。
因此，在優(yōu)化電壓時(shí)不可孤立進(jìn)行，而應(yīng)放入整個(gè)優(yōu)化流程中考慮。
使用 1652660 系統(tǒng)進(jìn)行電穿孔時(shí)，電壓設(shè)置是一個(gè)必須認(rèn)真對(duì)待的步驟。建議按照以下原則執(zhí)行：
明確細(xì)胞類型、比色皿規(guī)格、目標(biāo)電場強(qiáng)度。
在設(shè)備界面輸入合適電壓，并設(shè)定其他相關(guān)參數(shù)（脈沖時(shí)間、次數(shù)、波型等）。
做預(yù)實(shí)驗(yàn)，梯度優(yōu)化電壓與其他變量，以取得高轉(zhuǎn)染效率且較低細(xì)胞損傷。
注重記錄并保存成功參數(shù)，以便重復(fù)使用。
遵循安全規(guī)范，防止電弧、設(shè)備損壞、樣本損失。
憑借 Gene Pulser Xcell 1652660 系統(tǒng)強(qiáng)大的參數(shù)調(diào)控能力（10–3000 V 輸出范圍、多波型支持、用戶協(xié)議存儲(chǔ)功能）用戶能夠靈活適配多種細(xì)胞類型，并通過合理設(shè)置電壓獲得穩(wěn)定、高效的電穿孔效果。希望以上關(guān)于電壓設(shè)置的詳盡說明能幫助您順利開展實(shí)驗(yàn)。若您有具體細(xì)胞類型、比色皿規(guī)格或目標(biāo)轉(zhuǎn)染體系，還可進(jìn)一步討論推薦電壓值及優(yōu)化流程。
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