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伯樂(lè)電穿孔儀 165-2660 是一款集高精度控制、模塊化結(jié)構(gòu)與安全保護(hù)于一體的電穿孔系統(tǒng)。該設(shè)備通過(guò)瞬間高壓脈沖作用于細(xì)胞，使細(xì)胞膜形成可逆性微孔，從而實(shí)現(xiàn)外源 DNA、RNA、蛋白質(zhì)等大分子的導(dǎo)入。
儀器設(shè)計(jì)適用于多種實(shí)驗(yàn)體系，包括細(xì)菌、酵母、植物原生質(zhì)體及哺乳動(dòng)物細(xì)胞。其核心優(yōu)勢(shì)在于輸出波形穩(wěn)定、電壓控制精準(zhǔn)、操作簡(jiǎn)便且重復(fù)性高。為了保證實(shí)驗(yàn)成功率，操作者需熟悉設(shè)備結(jié)構(gòu)與標(biāo)準(zhǔn)操作流程，并嚴(yán)格遵守安全規(guī)范。
在使用前，操作者應(yīng)了解電穿孔儀的基本結(jié)構(gòu)與功能。伯樂(lè) 165-2660 系統(tǒng)主要由以下部分構(gòu)成：
主控單元（Main Unit）
負(fù)責(zé)電能轉(zhuǎn)換與輸出控制，是儀器的核心部分。
內(nèi)含微處理控制系統(tǒng)，可精確設(shè)定電壓、電容、電阻及脈沖時(shí)間。
ShockPod 電擊槽
放置電擊杯的部分，負(fù)責(zé)將高壓脈沖傳遞給樣品。
內(nèi)置安全閉鎖開(kāi)關(guān)，蓋未合上時(shí)無(wú)法啟動(dòng)放電。
CE 模塊（電容擴(kuò)展模塊）
用于擴(kuò)展電容容量，調(diào)節(jié)時(shí)間常數(shù)與能量釋放速度，常用于指數(shù)衰減波模式。
PC 模塊（脈沖控制模塊）
調(diào)節(jié)輸出波形、電阻與脈沖時(shí)間，用于方波模式或多脈沖操作。
顯示與控制界面
前面板配有 LCD 顯示屏、功能按鍵與指示燈，用于參數(shù)設(shè)定和狀態(tài)監(jiān)控。
電擊杯與連接線
電擊杯有 0.1 cm、0.2 cm、0.4 cm 三種規(guī)格，對(duì)應(yīng)不同細(xì)胞類型與體積。
高壓連接線負(fù)責(zé)將能量安全傳遞至電擊槽。
實(shí)驗(yàn)臺(tái)平穩(wěn)、干燥，保持整潔，遠(yuǎn)離高濕和易燃物。
環(huán)境溫度控制在 20–25 ℃，濕度不超過(guò) 80%。
確保實(shí)驗(yàn)臺(tái)接地良好，電源電壓穩(wěn)定在 220 V ±10%。
插座必須帶有獨(dú)立地線，且接觸可靠。
不得使用延長(zhǎng)線或共用插座，以免電壓波動(dòng)。
儀器背面接地端應(yīng)接入實(shí)驗(yàn)室防靜電系統(tǒng)。
檢查主機(jī)、電擊槽及模塊外觀是否完好。
確認(rèn)電擊杯干凈、無(wú)裂紋、無(wú)導(dǎo)電殘留。
檢查風(fēng)扇與散熱孔是否暢通。
插好電源線與連接線，確保接頭牢固。
通電后進(jìn)行自檢，屏幕顯示“READY”方可進(jìn)入設(shè)置。
細(xì)胞狀態(tài)：處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，活性高，無(wú)污染。
緩沖液：使用低離子強(qiáng)度專用電穿孔緩沖液。
核酸溶液：DNA、RNA 或質(zhì)粒溶液濃度適中，純度高。
混合比例：一般為樣品 9 份 + 質(zhì)粒 1 份，混合后輕輕顛倒均勻。
避免氣泡：加入電擊杯后輕敲杯壁，使氣泡完全上浮。
將主控單元放在平穩(wěn)臺(tái)面上，保證四腳平衡。
將 ShockPod 電擊槽通過(guò)專用線纜連接至主機(jī)前端接口。
若需使用 CE 或 PC 模塊，在斷電狀態(tài)下插入后背接口。
插入電源線并接通地線。
打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，系統(tǒng)自檢通過(guò)后即可使用。
注意：模塊插拔必須在斷電狀態(tài)下進(jìn)行，切勿在通電時(shí)操作。
開(kāi)機(jī)后進(jìn)入主菜單，可選擇以下三種模式：
預(yù)設(shè)模式（Preset Protocol）：內(nèi)置不同細(xì)胞類型的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，適合新手使用。
手動(dòng)模式（Manual Mode）：可自定義電壓、電容、電阻及脈沖時(shí)間。
用戶模式（User Protocol）：保存自定義程序以便重復(fù)使用。
使用方向鍵選擇模式后按“ENTER”確認(rèn)進(jìn)入。
選擇“指數(shù)衰減波”或“方波”。
指數(shù)衰減波常用于細(xì)菌、酵母；方波適合哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
使用上下鍵調(diào)整電壓值。
電壓范圍 10–3000 V，可按細(xì)胞類型選擇。
| 細(xì)胞類型 | 電場(chǎng)強(qiáng)度（kV/cm） | 推薦電壓（V） | 電擊杯間隙 |
|---|---|---|---|
| 大腸桿菌 | 1.8–2.5 | 1800–2500 | 0.2 cm |
| 酵母 | 1.0–1.5 | 1000–1500 | 0.2 cm |
| 哺乳動(dòng)物細(xì)胞 | 0.3–0.8 | 300–800 | 0.4 cm |
使用 CE 模塊可在 25–3275 μF 范圍調(diào)節(jié)。
PC 模塊可設(shè)定電阻 50–1000 Ω 或選擇 ∞ 模式。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型靈活調(diào)節(jié)以控制能量釋放速率。
方波模式需設(shè)定持續(xù)時(shí)間（0.05–10 ms）和脈沖次數(shù)（1–10 次）。
多脈沖模式下，間隔一般設(shè)定為 3–5 秒。
將樣品加入電擊杯中，體積不超過(guò)容積的 80%。
檢查液面平整無(wú)氣泡。
打開(kāi) ShockPod 上蓋，放入電擊杯并對(duì)準(zhǔn)電極。
蓋上安全蓋后，屏幕顯示“Cuvette Ready”。
按下“PULSE”鍵開(kāi)始充電，待顯示“READY TO PULSE”后執(zhí)行放電。
放電結(jié)束后，顯示屏顯示放電曲線及參數(shù)值。
等待約 5 秒，確認(rèn)完全放電后取出電擊杯。
注意：放電過(guò)程中嚴(yán)禁觸碰儀器及電擊槽，防止高壓觸電。
迅速將電擊后的樣品加入預(yù)溫培養(yǎng)基中恢復(fù)。
對(duì)于細(xì)菌或酵母，恢復(fù)時(shí)間為 30 分鐘左右；哺乳動(dòng)物細(xì)胞需 1–2 小時(shí)。
樣品恢復(fù)后可進(jìn)行篩選、擴(kuò)增或下游檢測(cè)。
電擊杯使用后用去離子水清洗干凈并晾干備用。
電擊前可將電擊杯及樣品短暫預(yù)冷，減少電弧發(fā)生率。
使用低鹽緩沖液能顯著提升穿孔成功率。
初次使用某細(xì)胞類型時(shí)應(yīng)進(jìn)行電壓梯度測(cè)試，以確定最優(yōu)參數(shù)。
細(xì)胞密度和 DNA 濃度對(duì)轉(zhuǎn)化率影響顯著，建議記錄每次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以便優(yōu)化。
多脈沖模式可提高轉(zhuǎn)染效率，但會(huì)降低細(xì)胞存活率，應(yīng)平衡選擇。
實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)電源開(kāi)關(guān)處于關(guān)閉狀態(tài)后再連接線纜。
操作者需佩戴絕緣手套與防護(hù)眼鏡。
實(shí)驗(yàn)臺(tái)面保持干燥，禁止液體接觸主機(jī)與接口。
放電時(shí)人員需站在儀器側(cè)方，避免正面對(duì)高壓區(qū)。
電弧閃光、異味或異常聲音出現(xiàn)時(shí)立即停止操作并切斷電源。
嚴(yán)禁在開(kāi)機(jī)狀態(tài)下插拔模塊或打開(kāi)電擊槽。
長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)工作后需停機(jī) 10 分鐘降溫。
實(shí)驗(yàn)完成后，關(guān)閉主機(jī)電源，等待內(nèi)部電容完全放電。
拔下電源線與模塊連接線。
用干布擦拭儀器表面，保持清潔。
將電擊槽與電擊杯分開(kāi)晾干。
覆蓋防塵罩，將設(shè)備置于干燥通風(fēng)處保存。
系統(tǒng)可自動(dòng)保存最近一次實(shí)驗(yàn)參數(shù)。
用戶可手動(dòng)命名并存儲(chǔ)最多 50 組實(shí)驗(yàn)程序。
通過(guò) USB 接口可將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)導(dǎo)出至電腦進(jìn)行記錄與分析。
刪除舊程序時(shí)請(qǐng)確認(rèn)已備份，以免數(shù)據(jù)丟失。
每周檢查主機(jī)和模塊接口是否松動(dòng)。
每月清理風(fēng)扇與散熱口，防止灰塵堵塞。
每半年進(jìn)行一次輸出電壓校準(zhǔn)，確保精度。
定期檢查高壓線是否老化或有破損。
若設(shè)備長(zhǎng)時(shí)間閑置，每月通電運(yùn)行 5 分鐘以維持電容性能。
| 問(wèn)題 | 原因 | 解決方法 |
|---|---|---|
| 電弧放電或閃光 | 樣品含鹽或有氣泡 | 更換低鹽緩沖液，清除氣泡 |
| 電擊后無(wú)反應(yīng) | 蓋未閉合或參數(shù)未確認(rèn) | 檢查安全蓋并重新設(shè)定 |
| 轉(zhuǎn)化效率低 | 電壓不足或細(xì)胞狀態(tài)差 | 提高電壓或更換新鮮細(xì)胞 |
| 樣品死亡率高 | 電壓過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 降低參數(shù)重新測(cè)試 |
| 屏幕無(wú)顯示 | 電源線松動(dòng)或保險(xiǎn)絲熔斷 | 重新插接或更換保險(xiǎn)絲 |
| 模塊未識(shí)別 | 插頭松動(dòng)或接口臟污 | 拔插重連并清潔接口 |
設(shè)備僅限經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的實(shí)驗(yàn)人員使用。
每次實(shí)驗(yàn)前應(yīng)由操作人填寫(xiě)使用登記。
若設(shè)備出現(xiàn)異常，須立即報(bào)告管理員并暫停使用。
實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)專人負(fù)責(zé)儀器維護(hù)與定期校準(zhǔn)。
所有安全警示標(biāo)簽必須保持清晰可見(jiàn)。
嚴(yán)禁私自拆開(kāi)主機(jī)或更換內(nèi)部零件。
針對(duì)細(xì)菌實(shí)驗(yàn)
電壓較高、脈沖短；常用指數(shù)衰減波。
使用 0.2 cm 電擊杯，體積約 0.2 mL。
針對(duì)酵母實(shí)驗(yàn)
需去除細(xì)胞壁或使用特殊緩沖液以提升導(dǎo)入率。
可使用方波模式，時(shí)間適度延長(zhǎng)。
針對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞
電壓較低，脈沖時(shí)間長(zhǎng)；適合方波多脈沖模式。
加入恢復(fù)液可提高細(xì)胞存活率。
針對(duì)植物原生質(zhì)體
樣品粘度大，應(yīng)使用大間隙電擊杯并降低電壓。
適當(dāng)延長(zhǎng)放電時(shí)間。
伯樂(lè)電穿孔儀 165-2660 出廠前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢測(cè)，整機(jī)質(zhì)保三年，實(shí)行只換不修政策。為保持性能穩(wěn)定，應(yīng)遵守以下保養(yǎng)要求：
定期檢查接地線與保險(xiǎn)絲。
使用原廠電擊杯及附件，避免不兼容問(wèn)題。
每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后清理殘留液體并覆蓋防塵罩。
不得將設(shè)備暴露于潮濕或高溫環(huán)境。
存放環(huán)境溫度 –10 至 55 ℃，濕度 ≤ 90%。
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