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質(zhì)保3年只換不修，廠家長(zhǎng)沙實(shí)了個(gè)驗(yàn)儀器制造有限公司。
電穿孔技術(shù)（Electroporation）是現(xiàn)代分子生物學(xué)、細(xì)胞工程及基因編輯研究中不可或缺的技術(shù)之一。它通過在細(xì)胞懸液中施加高強(qiáng)度瞬時(shí)電場(chǎng)，使細(xì)胞膜形成可逆性微孔，從而實(shí)現(xiàn)外源 DNA、RNA 或蛋白質(zhì)分子的導(dǎo)入。相比化學(xué)轉(zhuǎn)染或病毒轉(zhuǎn)染方法，電穿孔具有無載體污染、適用細(xì)胞類型廣、重復(fù)性強(qiáng)等顯著優(yōu)點(diǎn)。
伯樂（Bio-Rad）GenePulser Xcell 電穿孔儀作為國(guó)際高端電穿孔系統(tǒng)的代表，其精確的參數(shù)控制、智能化操作界面以及穩(wěn)定的脈沖波形輸出，能夠顯著提高實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染效率與可重復(fù)性。本培訓(xùn)旨在幫助科研人員全面掌握該設(shè)備的工作原理、操作流程、參數(shù)設(shè)置、常見問題排查及維護(hù)方法，確保實(shí)驗(yàn)安全、高效、規(guī)范。
GenePulser Xcell 系統(tǒng)由主機(jī)、電容電阻模塊、波形控制單元、電極槽、安全保護(hù)電路及顯示面板組成，具備以下核心功能特征：
雙波形系統(tǒng)：支持指數(shù)衰減波（Exponential Decay）和方波（Square Wave）兩種模式，可適配不同類型細(xì)胞；
高精度輸出：電壓誤差小于±1%，保證每次放電一致；
多參數(shù)可編程控制：電壓、電容、電阻、脈沖次數(shù)、間隔時(shí)間均可獨(dú)立設(shè)定；
實(shí)時(shí)監(jiān)控系統(tǒng)：通過液晶屏顯示放電曲線及實(shí)際輸出參數(shù)；
數(shù)據(jù)存儲(chǔ)功能：可保存多達(dá)99組實(shí)驗(yàn)方案；
安全防護(hù)機(jī)制：內(nèi)置自動(dòng)放電、防電擊及過載保護(hù)裝置。
通過系統(tǒng)化培訓(xùn)，操作者能夠熟練掌握儀器結(jié)構(gòu)、工作原理與操作技巧，為后續(xù)科研實(shí)驗(yàn)打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
培訓(xùn)對(duì)象：
分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)人員；
實(shí)驗(yàn)室新進(jìn)科研人員；
技術(shù)支持與維護(hù)工程師。
培訓(xùn)要求：
具備基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)操作能力與生物安全意識(shí)；
熟悉實(shí)驗(yàn)室電氣設(shè)備使用規(guī)范；
理解電穿孔基本原理。
培訓(xùn)周期建議為 2 天理論教學(xué) + 1 天實(shí)踐操作，以實(shí)現(xiàn)理論理解與實(shí)操掌握的雙重目標(biāo)。
當(dāng)細(xì)胞暴露在高電場(chǎng)中，膜兩側(cè)形成電位差，導(dǎo)致脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)局部重排。若跨膜電位超過閾值，形成暫時(shí)性的通道孔洞。外源分子由此進(jìn)入細(xì)胞，隨后膜結(jié)構(gòu)恢復(fù)，完成導(dǎo)入過程。
關(guān)鍵影響因素：
電壓與電場(chǎng)強(qiáng)度決定孔洞大?。?/p>
電容與脈沖時(shí)間影響膜開放持續(xù)時(shí)間；
電阻決定能量釋放速度；
緩沖液導(dǎo)電性與溫度影響細(xì)胞存活率。
主機(jī)控制單元：負(fù)責(zé)參數(shù)設(shè)置與信號(hào)輸出；
電容/電阻模塊：控制能量存儲(chǔ)與釋放速度；
波形控制模塊：選擇指數(shù)衰減波或方波；
電極槽：放置樣品電穿孔杯，確保電場(chǎng)均勻；
安全保護(hù)裝置：自動(dòng)放電與過載防護(hù)；
顯示屏：實(shí)時(shí)顯示實(shí)驗(yàn)進(jìn)度與波形曲線。
操作前必須確認(rèn)接地良好；
禁止在通電狀態(tài)下開蓋或接觸電極；
電穿孔結(jié)束后等待自動(dòng)放電指示燈熄滅；
樣品應(yīng)無氣泡，以防電弧放電；
操作者佩戴絕緣手套。
檢查電源線與地線連接；
檢查電極槽無殘液；
啟動(dòng)儀器，確認(rèn)屏幕顯示正常；
進(jìn)行空載放電測(cè)試以確保波形輸出正常。
細(xì)胞需處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，活力高；
外源 DNA/RNA 需高純度，無鹽污染；
使用低離子強(qiáng)度緩沖液（如10%甘油）；
樣品體積控制在電穿孔杯允許范圍內(nèi)（通常為50–100 μL）。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型選擇模式與參數(shù)：
| 實(shí)驗(yàn)類型 | 模式 | 電壓 (V) | 電容 (μF) | 電阻 (Ω) | 波形 | 電極間距 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 大腸桿菌轉(zhuǎn)化 | 指數(shù)衰減 | 2500 | 25 | 200 | Exponential | 0.2 cm |
| 酵母轉(zhuǎn)化 | 指數(shù)衰減 | 1500 | 50 | 400 | Exponential | 0.4 cm |
| 哺乳動(dòng)物細(xì)胞 | 方波 | 250 | - | - | Square | 0.4 cm |
| 植物原生質(zhì)體 | 方波 | 400 | - | - | Square | 0.4 cm |
將細(xì)胞與 DNA 混合后加入電穿孔杯；
插入電極槽并關(guān)閉防護(hù)蓋；
按下“PULSE”按鈕啟動(dòng)放電；
實(shí)時(shí)觀察顯示屏上的波形曲線；
放電完成后，待自動(dòng)放電結(jié)束取出樣品；
將樣品立即加入復(fù)蘇培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
細(xì)菌與酵母：37℃ 培養(yǎng) 1 小時(shí)后平板篩選；
哺乳動(dòng)物細(xì)胞：加入完全培養(yǎng)基靜置 10 分鐘再培養(yǎng)；
植物細(xì)胞：轉(zhuǎn)入高滲培養(yǎng)液中培養(yǎng) 24 小時(shí)。
| 問題 | 可能原因 | 解決方法 |
|---|---|---|
| 無放電現(xiàn)象 | 電極接觸不良、參數(shù)未設(shè)定 | 檢查電極與設(shè)置 |
| 電弧放電 | 樣品中有氣泡或離子濃度過高 | 去除氣泡、換低離子緩沖液 |
| 波形異常 | 電容老化或接線松動(dòng) | 更換電容模塊、檢查連接 |
| 轉(zhuǎn)染效率低 | 電壓不足、DNA質(zhì)量差 | 提高電壓或優(yōu)化DNA純度 |
| 細(xì)胞死亡率高 | 電壓過高或時(shí)間過長(zhǎng) | 降低電壓、縮短脈沖時(shí)間 |
GenePulser Xcell 的閉環(huán)控制系統(tǒng)可自動(dòng)監(jiān)測(cè)電壓輸出與波形變化，確保誤差在1%以內(nèi)。培訓(xùn)內(nèi)容要求操作者掌握：
固定參數(shù)模板使用：可保存并調(diào)用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方案；
重復(fù)性評(píng)估：每批次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，計(jì)算轉(zhuǎn)染效率標(biāo)準(zhǔn)差；
誤差控制：溫度、導(dǎo)電性、細(xì)胞狀態(tài)保持一致；
數(shù)據(jù)記錄：填寫標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)記錄表，保存波形文件。
杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
